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體外蛋白表達有這些特點(diǎn)值得你知道

更新時(shí)間：2021-09-09 點(diǎn)擊次數：1503

　　蛋白表達就是重組DNA的一種實(shí)現技術(shù)，是用人為的方法將某一供體生物的遺傳物質(zhì)-DNA大分子提取出來(lái)，之后在離體的條件下用適當的工具酶進(jìn)行切割，再把它與載體的DNA分子連接起來(lái)，然后一起導入受體細胞中，從而使得外源物質(zhì)在其中“安家落戶(hù)”，進(jìn)行正常的復制和表達。利用重組蛋白表達技術(shù)，對蛋白質(zhì)功能結構進(jìn)行研究，給人類(lèi)生產(chǎn)、生活帶來(lái)了極大的影響，在各個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮了重要的作用。

　　體外蛋白表達在大腸桿菌蛋白表達實(shí)驗中，經(jīng)常會(huì )遇到蛋白表達不出來(lái)、表達出的蛋白沒(méi)有活性、蛋白表達過(guò)程中容易形成包涵體等情況，還要分析出現這些情況的原因：

　　1、目的蛋白不適合在大腸桿菌中表達。包括稀有密碼子、mRNA結構、跨膜區等；

　　2、表達條件需要進(jìn)一步優(yōu)化。比如溫度、分子伴侶、適合的表達宿主等；

　　3、采用哪種溫和復性條件可以提高蛋白活性，減少包涵體的形成等等。

　　體外蛋白表達系統的特點(diǎn)：

　　是一種簡(jiǎn)單快速的蛋白質(zhì)體外表達系統。基因的轉錄和翻譯基于大腸桿菌的內源TXTL機制，在體外建立高效的無(wú)細胞反應體系。同時(shí)，又保證了表達系統的兼容性。

　　表達系統操作簡(jiǎn)單，僅需將線(xiàn)性模板或質(zhì)粒混勻，目標蛋白在數小時(shí)內即可表達出來(lái)。不需要轉化、克隆篩選和細胞裂解，避免了包涵體的形成。同時(shí)，避免了產(chǎn)物純化過(guò)程中目標蛋白的損失。

　　蛋白表達系統一次實(shí)驗可對多個(gè)樣品進(jìn)行操作，最小的反應體系是12 μl，表達出來(lái)的蛋白濃度能達到1μg/μL，反應體系可等比例擴大。反應系統里添加了多種大腸桿菌稀有密碼子，去除了密碼子偏好的問(wèn)題，并且表達的蛋白可正常折疊。

體外蛋白表達